Tuần trước, chúng tôi đã chia sẻ một số lưu ý về việc sử dụng điện di màng cellulose axetat và hôm nay chúng tôi sẽ kết thúc chủ đề này tại đây để bạn tham khảo.
Sự lựa chọn của Nồng độ đệm
Nồng độ đệm được sử dụng trong điện di màng cellulose axetat thường thấp hơn nồng độ đệm được sử dụng trong điện di trên giấy.Độ pH thường được sử dụng là 8,6Bđệm trọng tài thường được chọn trong khoảng từ 0,05 mol/L đến 0,09 mol/L.Khi lựa chọn nồng độ, việc xác định sơ bộ được thực hiện.Ví dụ, nếu chiều dài của dải màng giữa các điện cực trong buồng điện di là 8-10cm thì cần có điện áp 25V trên mỗi cm chiều dài màng và cường độ dòng điện phải là 0,4-0,5 mA trên mỗi cm chiều rộng màng.Nếu không đạt được hoặc vượt quá các giá trị này trong quá trình điện di thì nên tăng hoặc pha loãng nồng độ đệm.
Nồng độ đệm quá thấp sẽ dẫn đến sự chuyển động nhanh của các dải và tăng độ rộng của dải.Mặt khác, nồng độ đệm quá cao sẽ làm chậm quá trình di chuyển dải, gây khó khăn cho việc phân biệt các dải phân tách nhất định.
Cần lưu ý rằng trong điện di màng cellulose axetat, một phần đáng kể dòng điện được dẫn qua mẫu, tạo ra một lượng nhiệt đáng kể.Đôi khi, nồng độ đệm được chọn có thể được coi là phù hợp.Tuy nhiên, trong điều kiện nhiệt độ môi trường tăng hoặc khi sử dụng điện áp cao hơn, sự bay hơi của nước do nhiệt có thể tăng lên, dẫn đến nồng độ đệm quá cao và thậm chí khiến màng bị khô.
Khối lượng mẫu
Trong điện di màng cellulose axetat, lượng thể tích mẫu được xác định bởi nhiều yếu tố khác nhau, bao gồm điều kiện điện di, tính chất của mẫu, phương pháp nhuộm và kỹ thuật phát hiện.Theo nguyên tắc chung, phương pháp phát hiện càng nhạy thì thể tích mẫu càng nhỏ, thuận lợi cho việc phân tách.Nếu thể tích mẫu quá nhiều, các mẫu phân tách điện di có thể không rõ ràng và việc nhuộm màu cũng có thể tốn thời gian.Tuy nhiên, khi phân tích định lượng các dải màu tách biệt bằng phương pháp phát hiện đo màu rửa giải, thể tích mẫu không được quá nhỏ vì có thể dẫn đến giá trị độ hấp thụ thấp hơn đối với một số thành phần, dẫn đến sai số cao hơn khi tính toán hàm lượng của chúng.Trong những trường hợp như vậy, thể tích mẫu phải được tăng lên một cách thích hợp.
Thông thường, thể tích mẫu được thêm vào trên mỗi cm của dòng ứng dụng mẫu nằm trong khoảng từ 0,1 đến 5 μL, tương đương với lượng mẫu từ 5 đến 1000 μg.Ví dụ, trong phân tích điện di protein huyết thanh thông thường, thể tích mẫu được thêm vào trên mỗi cm của dòng ứng dụng thường không vượt quá 1 μL, tương đương với 60 đến 80 μg protein.Tuy nhiên, khi phân tích lipoprotein hoặc glycoprotein bằng cùng một phương pháp điện di, thể tích mẫu cần phải tăng lên tương ứng.
Tóm lại, khối lượng mẫu phù hợp nhất nên được lựa chọn dựa trên các điều kiện cụ thể thông qua một loạt các thí nghiệm sơ bộ.
Lựa chọn dung dịch nhuộm
Các dải tách biệt trong điện di màng cellulose axetat thường được nhuộm màu trước khi phát hiện.Các thành phần mẫu khác nhau đòi hỏi các phương pháp nhuộm khác nhau và các phương pháp nhuộm phù hợp cho điện di màng xenlulo axetat có thể không hoàn toàn áp dụng được cho giấy lọc.
Có ba nguyên tắc chính để lựa chọn dung dịch nhuộm chomàng cellulose axetat.Trước hết,Thuốc nhuộm hòa tan trong nước nên được ưu tiên hơn thuốc nhuộm hòa tan trong rượu để tránh sự co rút và biến dạng màng do dung dịch nhuộm sau này gây ra.Sau khi nhuộm, điều quan trọng là phải rửa sạch màng bằng nước và giảm thiểu thời gian nhuộm.Nếu không, màng có thể bị cuộn tròn hoặc co lại, điều này sẽ ảnh hưởng đến việc phát hiện tiếp theo.
Thứ hai, tốt nhất nên chọn thuốc nhuộm có ái lực nhuộm màu mạnh cho mẫu.Trong điện di màng cellulose acetate của protein huyết thanh, amino black 10B thường được sử dụng vì ái lực nhuộm màu mạnh đối với các thành phần protein huyết thanh khác nhau và tính ổn định của nó.
Thứ ba, nên chọn thuốc nhuộm chất lượng đáng tin cậy.Một số loại thuốc nhuộm, mặc dù có cùng tên nhưng có thể chứa tạp chất dẫn đến nền đặc biệt tối sau khi nhuộm.Điều này thậm chí có thể làm mờ các dải được phân tách rõ ràng ban đầu, khiến chúng khó phân biệt.
Cuối cùng, việc lựa chọn nồng độ dung dịch nhuộm là quan trọng.Về mặt lý thuyết, có vẻ như nồng độ dung dịch nhuộm cao hơn sẽ dẫn đến nhuộm kỹ hơn các thành phần mẫu và cho kết quả nhuộm tốt hơn.Tuy nhiên, đây không phải là trường hợp.Ái lực liên kết giữa các thành phần mẫu và thuốc nhuộm có một giới hạn nhất định, không tăng khi tăng nồng độ dung dịch nhuộm.Ngược lại, nồng độ dung dịch nhuộm quá cao không chỉ gây lãng phí thuốc nhuộm mà còn gây khó khăn cho việc đạt được nền rõ ràng.Hơn nữa, khi cường độ màu đạt đến một giá trị tối đa nhất định, đường cong hấp thụ của thuốc nhuộm không tuân theo mối quan hệ tuyến tính, đặc biệt là trong các phép đo định lượng. Trong điện di màng cellulose axetat, nồng độ dung dịch nhuộm thường thấp hơn nồng độ được sử dụng trong điện di trên giấy.
Thông tin chi tiết cần biết về Công nghệ sinh học Liuyi Bắc Kinh's màng cellulose axetatbể điện di và ứng dụng điện di của nó, vui lòng truy cập tại đây:
tôiThí nghiệm tách protein huyết thanh bằng màng Cellulose Acetate
tôiĐiện di màng Cellulose Acetate
tôiMột số điểm cần lưu ý khi sử dụng phương pháp điện di màng Cellulose Acetate (1)
Nếu bạn có bất kỳ kế hoạch mua hàng nào cho sản phẩm của chúng tôi, vui lòng liên hệ với chúng tôi.Bạn có thể gửi tin nhắn cho chúng tôi qua email[email được bảo vệ]hoặc[email được bảo vệ], hoặc vui lòng gọi cho chúng tôi theo số +86 15810650221 hoặc thêm Whatsapp +86 15810650221 hoặc Wechat: 15810650221.
Thẩm quyền giải quyết:Điện di (Ấn bản thứ hai) của ông Li
Thời gian đăng: Jun-06-2023