Nguyên tắc
Điện di màng cellulose axetat là phương pháp điện di sử dụng màng cellulose axetat làm chất hỗ trợ.Hiện tượng các hạt tích điện di chuyển về phía điện cực đối diện dưới tác dụng của điện trường được gọi là điện di.Vì mỗi protein có một điểm đẳng điện cụ thể nên nếu đặt protein vào dung dịch có độ pH thấp hơn điểm đẳng điện của nó thì protein sẽ tích điện dương và di chuyển về phía điện cực âm.Ngược lại, nó di chuyển về cực dương.Bởi vì tốc độ của các phân tử protein chuyển động trong điện trường có liên quan đến điện tích, hình dạng và kích thước của các phân tử nên các protein khác nhau có thể được phân tách bằng điện di.Huyết thanh chứa nhiều loại protein, tất cả đều có điểm đẳng điện ở pH7,5 trở xuống.Khi huyết thanh được cho vào đệm pH 8,6 để chạy điện di, tất cả protein trong huyết thanh đều tích điện âm và sẽ di chuyển về phía dương trong điện trường.Vì các protein huyết thanh khác nhau có điện tích khác nhau ở cùng độ pH, nên các hạt phân tử có kích thước khác nhau và do đó tốc độ di chuyển cũng khác nhau và chúng được phân tách bằng điện di.Điểm đẳng điện và trọng lượng phân tử của protein huyết thanh được thể hiện trong bảng dưới đây:
| Chất đạm | Điểm đẳng điện (PI) | Trọng lượng phân tử |
| Albumin | 4,88 | 69 000 |
| α1-gluulin | 5 giờ 00 | 200 000 |
| α2-gluulin | 5.06 | 300 000 |
| β-gluulin | 5.12 | 9 000~150 000 |
| γ-gluulin | 6,85 ~ 7,50 | 156 000~ 300 000 |
Thí nghiệm nhằm tách các protein khác nhau trong huyết thanh bằng màng cellulose acetate (viết tắt. CAM) làm môi trường hỗ trợ.CAM là một loại lỏng có bọtemàng có độ đồng đều tốt, độ dày 0,1mm-1,5mm, có khả năng hút nước nhất định.
Vật liệu, dụng cụ và thuốc thử cho điện di CAM
Mẫu:huyết thanh người khỏe mạnh
Dụng cụ:nguồn điện DYY-6C, bể điện di DYCP-38C, tải mẫu cao cấp WD-9404
Thuốc thử
1) màng xenlulo axetat 7X9cm
2) Dung dịch đệm barbitol PH 8.6 (cường độ ion 0,05-0,09, là 0,06tid.): lấy 1,84g axit Diethyl barbituric, sau đó lấy 1,03g Diethyl natri pentobarbital, thêm một ít nước cất đun nóng để hòa tan và tạo thành lên tới 1000ml;
3) Vết bẩn: Ponceau S 0,2g, Trichloroacetic 3g, thêm 100ml nước cất;
4) TBS/T hoặc PBS/T: 45ml ethanol 95%, 5ml axit axetic băng, thêm 50ml nước cất;
5) Dung dịch làm sạch: 70ml ethanol khan, 30ml axit axetic băng.
Phương pháp thử nghiệmd
1) Chuẩn bị màng: Nhúng màng vào dung dịch đệm barbitol 30 phút-8h, lấy ra, loại bỏ dung dịch dư bằng giấy thấm.
2) Nạp mẫu: Phân biệt mặt nhám và mặt nhẵn của màng, đánh dấu một đường cách đầu trên của màng 1,5cm một đường.Tải mẫu bằng công cụ tải mẫu ưu việt ở mặt thô.Lưu ý: Mẫu phải được nạp ở mặt thô của màng.Sau khi mẫu huyết thanh đã thấm hoàn toàn vào màng, lật màng lại, úp mặt thô (có mẫu) úp xuống bể, mặt còn lại có mẫu được đặt vào điện cực âm.
3) Điện di: Bật nguồn điện, 0,4～Màng 0,6m A/cm, thời gian chạy 30-45 phút.Sau khi chạy điện di, tắt nguồn.
4) Vết bẩn và làm sạch: Lấy màng ra khỏi bể và ngâmit vào dung dịch thuốc nhuộm trong 5 phút, sau đó làm sạch nhiều lần trong dung dịch tẩy rửa 3-4 lần cho đến khi màu nền trong.Các protein huyết thanh phải được hiển thị trên các dải và thông thường có năm vùng, tạo thành đầu cuối của vạch được đánh dấu, Albumin, α1-gloulin, α2-gloulin, β-gloulin, γ-gloulin.
5) Bảo quản: đưa điện di khôban nhạctrong dung dịch tẩy rửa khoảng 10-15 phút, sau đó lấy ra và dán lên kính sạch, sau khi khô sẽ trở thành một lớp màng trong suốtban nhạc.
Cuộc thí nghiệmKết quả
Hiệu quả tách mẫu huyết thanh tốt và không có hiện tượng bám đuôi.Độ lặp lại của kết quả thay đổi tùy theo quy trình thử nghiệm và phương pháp của người thử nghiệm và độ lặp lại cao.
Phần kết luận
Hệ thống phát hiện điện di lâm sàng nhanh chóng (Bể điện diDYCP-38C,Nguồn cấpDYY-6C và tải mẫu cao cấp WD-9404) do chúng tôi sản xuấtcông ty Công ty TNHH Công nghệ sinh học Liuyi Bắc Kinhđáp ứng yêu cầu thí nghiệm,Vàkết quả có thể lặp lại, đơn giản và nhanh chóng, phù hợp vớigiảng bàinghiên cứu.
Lưu Nghĩa Bắc KinhCông ty TNHH Công nghệ sinh học chuyên sản xuất các sản phẩm điện di phục vụ ngành khoa học đời sống,có lịch sử hơn 50 năm tại Trung Quốc và công ty có thể cung cấp các sản phẩm ổn định và chất lượng cao trên toàn thế giới.Qua nhiều năm phát triển, thật xứng đáng cho sự lựa chọn của bạn!
Chúng tôi hiện đang tìm kiếm đối tác, cả bể điện di OEM và nhà phân phối đều được hoan nghênh.
Để biết thêm thông tin về chúng tôi, vui lòng liên hệ với chúng tôi qua email[email được bảo vệ]hoặc[email được bảo vệ].
Thời gian đăng: 14-11-2022