Thí nghiệm điện di huyết sắc tố

Nguyên tắc thí nghiệm

Điện di huyết sắc tố nhằm mục đích phát hiện và xác nhận các loại huyết sắc tố bình thường và bất thường khác nhau.

Do điện tích và điểm đẳng điện của các loại hemoglobin khác nhau, trong một dung dịch đệm pH nhất định, khi điểm đẳng điện của hemoglobin thấp hơn độ pH của dung dịch đệm, hemoglobin mang điện tích âm và di chuyển về phía cực dương trong quá trình điện di. Ngược lại, huyết sắc tố mang điện tích dương sẽ di chuyển về phía cực âm.

Dưới một điện áp nhất định và sau một thời gian điện di cụ thể, các huyết sắc tố có điện tích và trọng lượng phân tử khác nhau biểu hiện các hướng và tốc độ di chuyển khác nhau. Điều này cho phép tách các vùng riêng biệt và phân tích quét màu hoặc điện di tiếp theo có thể được thực hiện trên các vùng này để định lượng các loại huyết sắc tố khác nhau. Phương pháp được sử dụng phổ biến nhất là điện di màng cellulose axetat ở pH 8,6.

Trong tế bào chất, các nhóm ethylene glycol (CHOH-CHOH) có trong glycogen hoặc các chất polysaccharide (như mucopolysaccharides, mucoprotein, glycoprotein, glycolipids, v.v.) bị oxy hóa bởi axit tuần hoàn và chuyển thành nhóm aldehyd (CHO-CHO). Các nhóm aldehyd này kết hợp với thuốc thử Schiff màu đỏ tía không màu, tạo thành thuốc nhuộm màu đỏ tím lắng đọng ở những nơi có polysaccharide trong tế bào. Phản ứng này được gọi là nhuộm axit-Schiff (PAS) định kỳ, trước đây gọi là nhuộm glycogen.

Phương pháp thí nghiệm

Nguyên vật liệu:Xellulose axetatnhớbrane, thiết bị điện di(DYCP-38C và nguồn điện DYY-6C), Công cụ tải mẫu cao cấp(pipet), máy đo quang phổ, cuvet đo màu, bộ đệm.

Bộ đệm:

(1) Dung dịch đệm TEB pH 8,6: Cân 10,29 g Tris, 0,6 g EDTA, 3,2 g axit boric và thêm nước cất đến 1000 ml.

(2) Dung dịch đệm borat: Cân 6,87 g borax và 5,56 g axit boric, thêm nước cất đến 1000 ml.

Thủ tục:

Pđiều chế dung dịch Hemoglobin

Lấy 3 ml máu chứa heparin hoặc natri citrate làm thuốc chống đông máu. Ly tâm ở tốc độ 2000 vòng/phút trong 10 phút và loại bỏ huyết tương. Rửa hồng cầu ba lần bằng nước muối sinh lý (750 vòng/phút, ly tâm 5 phút mỗi lần). Ly tâm ở tốc độ 2200 vòng/phút trong 10 phút và loại bỏ phần nổi phía trên. Thêm một lượng nước cất tương đương, sau đó thêm 0,5 lần thể tích cacbon tetraclorua. Lắc mạnh trong 5 phút, sau đó ly tâm ở tốc độ 2200 vòng/phút trong 10 phút để thu được dung dịch Hb trên để sử dụng sau.

Ngâm màng

Cắt màng axetat xenlulo thành các dải có kích thước 3 cm x 8 cm. Ngâm chúng trong dung dịch đệm TEB pH 8,6 cho đến khi bão hòa hoàn toàn, sau đó lấy ra và thấm khô bằng giấy lọc.

Đốm

Dùng pipet chấm 10 µl dung dịch hemoglobin theo chiều dọc lên màng cellulose axetat (mặt thô), cách mép khoảng 1,5 cm.

Điện di

Đổ dung dịch đệm borat vào buồng điện di. Đặt màng axetat xenlulo có mặt có đốm ở đầu cực âm của buồng. Chạy ở điện áp 200 V trong 30 phút.

rửa giải

Cắt vùng HbA và HbA2, đặt chúng vào các ống nghiệm riêng biệt và thêm lần lượt 15 ml và 3 ml nước cất. Lắc nhẹ để rửa giải hoàn toàn hemoglobin, sau đó trộn đều.

Đo màu

Điểm zero độ hấp thụ bằng nước cất cho dung dịch rửa giải và đo độ hấp thụ ở bước sóng 415 nm.

Tính toán

HbA2(%) = Độ hấp thụ của ống HbA2 / (Độ hấp thụ của ống HbA × 5 + Độ hấp thụ của ống HbA2) × 100%

Tính toán kết quả thí nghiệm

Phạm vi tham chiếu cho điện di đệm Cellulose Acetate pH 8,6 TEB: HbA > 95%, HbA2 1%-3,1%

Ghi chú

Thời gian điện di không nên quá dài. Màng cellulose axetat không bị khô trong quá trình điện di. Dừng điện di khi HbA và HbA2 đã tách biệt rõ ràng. Điện di kéo dài có thể gây ra sự khuếch tán và làm mờ dải.

Tránh sử dụng quá nhiều mẫu. Chất lỏng hemoglobin quá mức có thể dẫn đến bong dải hoặc nhuộm màu không đủ, dẫn đến nồng độ HbA tăng cao giả tạo.

Ngăn chặn sự ô nhiễm màng cellulose axetat với protein.

Dòng điện không được quá cao; nếu không, các dải hemoglobin có thể không tách rời được.

Luôn lấy mẫu từ những người bình thường và các huyết sắc tố bất thường cần thiết đã biết làm đối chứng.

Công nghệ sinh học Liuyi Bắc Kinh sản xuất bể điện di chuyên nghiệp để điện di huyết sắc tố làm mẫuDYCP-38Cbể điện di màng cellulose axetat, và có hai mô hình cung cấp năng lượng điện di cho bể điện di màng cellulose axetatDYY-2CVàDYY-6Ccung cấp điện.

Trong khi đó, Công nghệ sinh học Liuyi Bắc Kinh cung cấp màng cellulose acetate cho khách hàng và kích thước của màng cellulose acetate có thể được tùy chỉnh. Chào mừng bạn đến hỏi chúng tôi để lấy mẫu và biết thêm thông tin.

Thương hiệu Liuyi Bắc Kinh có lịch sử hơn 50 năm tại Trung Quốc và công ty có thể cung cấp các sản phẩm ổn định và chất lượng cao trên toàn thế giới. Qua nhiều năm phát triển, thật xứng đáng cho sự lựa chọn của bạn!

Chúng tôi hiện đang tìm kiếm đối tác, cả bể điện di OEM và nhà phân phối đều được hoan nghênh.

Nếu bạn có bất kỳ kế hoạch mua hàng nào cho sản phẩm của chúng tôi, vui lòng liên hệ với chúng tôi. Bạn có thể gửi tin nhắn cho chúng tôi qua email[email được bảo vệ]hoặc[email được bảo vệ], hoặc vui lòng gọi cho chúng tôi theo số +86 15810650221 hoặc thêm Whatsapp +86 15810650221 hoặc Wechat: 15810650221