Xét nghiệm Comet (Điện di gel đơn bào, SCGE) là một kỹ thuật nhạy và nhanh, chủ yếu được sử dụng để phát hiện tổn thương DNA và sửa chữa trong từng tế bào. Cái tên “Xét nghiệm sao chổi” xuất phát từ hình dạng đặc trưng giống sao chổi xuất hiện trong kết quả: nhân tế bào tạo thành “đầu”, trong khi các đoạn DNA bị hư hỏng di chuyển, tạo ra “đuôi” giống sao chổi.
Nguyên tắc
Nguyên lý của Xét nghiệm Sao chổi dựa trên sự di chuyển của các đoạn DNA trong điện trường. DNA nguyên vẹn vẫn còn trong nhân tế bào, trong khi DNA bị hư hỏng hoặc bị phân mảnh di chuyển về phía cực dương, tạo thành “đuôi” của sao chổi. Chiều dài và cường độ của đuôi tỷ lệ thuận với mức độ tổn thương DNA.
Thủ tục
- Chuẩn bị tế bào: Các tế bào cần kiểm tra được trộn với agarose có nhiệt độ nóng chảy thấp và trải trên các phiến kính hiển vi để tạo thành một lớp đồng nhất.
- Ly giải tế bào: Các phiến kính được ngâm trong dung dịch ly giải để loại bỏ màng tế bào và màng nhân, làm lộ ra DNA.
- Điện di: Các phiến kính được đặt trong buồng điện di trong điều kiện kiềm hoặc trung tính. Các đoạn DNA bị hư hỏng di chuyển về phía điện cực dương dưới tác động của điện trường.
- Nhuộm: Sau khi điện di, các phiến kính được nhuộm bằng thuốc nhuộm huỳnh quang (ví dụ, ethidium bromide) để hiển thị DNA.
- Phân tích kính hiển vi: Sử dụng kính hiển vi huỳnh quang hoặc phần mềm chuyên dụng, hình dạng sao chổi được phân tích và đo các thông số như chiều dài đuôi và cường độ.
Hình ảnh từ biorender
Phân tích dữ liệu
Kết quả từ Xét nghiệm Sao chổi được đánh giá dựa trên một số thông số chính:
- Chiều dài đuôi: Biểu thị khoảng cách DNA di chuyển, biểu thị mức độ tổn thương DNA.
- Nội dung DNA đuôi: Tỷ lệ phần trăm DNA di chuyển vào đuôi, thường được sử dụng làm thước đo định lượng mức độ tổn hại DNA.
- Khoảnh khắc đuôi ô liu (OTM): Kết hợp cả chiều dài đuôi và hàm lượng DNA của đuôi để cung cấp thước đo toàn diện hơn về mức độ tổn hại DNA.
Ứng dụng
- Nghiên cứu về độc tính gen: Xét nghiệm Comet được sử dụng rộng rãi để đánh giá tác động của hóa chất, thuốc và bức xạ lên DNA của tế bào, khiến nó trở thành công cụ chính để kiểm tra độc tính gen.
- Độc chất môi trường: Nó giúp phân tích tác động của các chất ô nhiễm môi trường lên DNA của sinh vật, cung cấp cái nhìn sâu sắc về sự an toàn của hệ sinh thái.
- Nghiên cứu y tế và lâm sàng: Xét nghiệm Comet được sử dụng để nghiên cứu cơ chế sửa chữa DNA, ung thư và các bệnh liên quan đến DNA khác. Nó cũng đánh giá tác động của các liệu pháp điều trị ung thư như xạ trị và hóa trị lên DNA.
- Khoa học Thực phẩm và Nông nghiệp: Được sử dụng để đánh giá mức độ an toàn của thuốc trừ sâu, phụ gia thực phẩm và các chất khác cũng như nghiên cứu tác động độc hại của chúng trên mô hình động vật.
Thuận lợi
- Độ nhạy cao: Có khả năng phát hiện mức độ tổn thương DNA thấp.
- Thao tác đơn giản: Kỹ thuật này đơn giản nên phù hợp cho sàng lọc thông lượng cao.
- Ứng dụng rộng rãi: Nó có thể được áp dụng cho nhiều loại tế bào khác nhau, bao gồm cả tế bào động vật và thực vật.
- Những thách thức về định lượng: Trong khi cung cấp dữ liệu định tính về tổn thương DNA, phân tích định lượng phụ thuộc rất nhiều vào kỹ thuật phân tích hình ảnh và phần mềm.
- Điều kiện thí nghiệm: Kết quả có thể bị ảnh hưởng bởi các yếu tố như thời gian điện di và độ pH, đòi hỏi phải kiểm soát cẩn thận các điều kiện thí nghiệm.
Hạn chế
Xét nghiệm Comet là một công cụ vô giá trong nghiên cứu y sinh, khoa học môi trường và phát triển thuốc do tính linh hoạt và độ nhạy cao trong việc phát hiện tổn thương và sửa chữa DNA. Công ty TNHH Công nghệ sinh học Liuyi Bắc Kinh (Công nghệ sinh học Liuyi)cung cấp buồng điện di ngang để xét nghiệm sao chổi. Chào mừng bạn đến liên hệ với chúng tôi để thảo luận vềXét nghiệm sao chổigiao thức.
Công ty TNHH Công nghệ sinh học Liuyi Bắc Kinh (Công nghệ sinh học Liuyi) chuyên sản xuất các thiết bị điện di trong hơn 50 năm với đội ngũ kỹ thuật chuyên nghiệp và trung tâm R&D của chúng tôi. Chúng tôi có dây chuyền sản xuất đáng tin cậy và hoàn chỉnh từ thiết kế đến kiểm tra, kho bãi cũng như hỗ trợ tiếp thị. Các sản phẩm chính của chúng tôi là Tế bào điện di (bể/buồng), Bộ nguồn điện di, Bộ chuyển đổi đèn LED xanh, Bộ chuyển đổi tia cực tím, Hệ thống phân tích & hình ảnh gel, v.v. Chúng tôi cũng cung cấp các dụng cụ phòng thí nghiệm như dụng cụ PCR, máy trộn xoáy và máy ly tâm cho phòng thí nghiệm.
Nếu bạn có bất kỳ kế hoạch mua hàng nào cho sản phẩm của chúng tôi, vui lòng liên hệ với chúng tôi. Bạn có thể gửi tin nhắn cho chúng tôi qua email[email được bảo vệ]hoặc[email được bảo vệ], hoặc vui lòng gọi cho chúng tôi theo số +86 15810650221 hoặc thêm Whatsapp +86 15810650221 hoặc Wechat: 15810650221.
Vui lòng quét mã QR để thêm vào Whatsapp hoặc WeChat.
Thời gian đăng: 20-09-2024