1. Phân loại
Điện di trên gel được chia thành loại dọc (bao gồm gel cột và gel phiến) và loại ngang (chủ yếu là gel phiến) (Hình 6-18). Nói chung, sự phân tách theo chiều dọc tốt hơn một chút so với phương pháp ngang, nhưng việc chuẩn bị gel theo chiều ngang có ít nhất bốn ưu điểm: có sự hỗ trợ bên dưới toàn bộ gel, cho phép sử dụng agarose nồng độ thấp; có thể chuẩn bị các tấm gel agarose có thông số kỹ thuật khác nhau; chuẩn bị gel và nạp mẫu thuận tiện hơn; buồng điện di dễ xây dựng và tiết kiệm chi phí. Do điện di ngang được thực hiện với tấm gel agarose ngập hoàn toàn dưới bề mặt của đệm điện di khoảng 1mm nên nó còn được gọi là điện di chìm.
Bể điện di DYCP-31DN dùng cho điện di trên gel agarose
2.Hệ thống đệm
Trong quá trình tách axit nucleic, hầu hết các hệ thống đều áp dụng hệ thống liên tục. Các dung dịch đệm điện di thường được sử dụng bao gồm dung dịch đệm TBE (0,08mol/L Tris·HCl, pH 8,5, axit boric 0,08mol/L, 0,0024mol/L EDTA) và dung dịch đệm THE (0,04mol/L Tris·HCl, pH 7,8, 0,02mol/L dung dịch đệm natri axetat, 0,0018mol/L EDTA). Những chất đệm này thường được chuẩn bị dưới dạng dung dịch gốc 10x và được pha loãng đến nồng độ cần thiết khi sử dụng. Tốc độ di chuyển của DNA mạch thẳng và DNA vòng trong gel agarose thay đổi tùy theo dung dịch đệm được sử dụng. Trong bộ đệm THE, tốc độ di chuyển của DNA tuyến tính lớn hơn tốc độ di chuyển của DNA vòng, trong khi ở bộ đệm TBE thì điều ngược lại là đúng.
3.Điều chế gel Agarose
(1) Chuẩn bị gel Agarose ngang
(a) Chuẩn bị nồng độ gel agarose cần thiết bằng dung dịch đệm điện di 1x.
(b) Đun nóng agarose để hòa tan hoàn toàn trong nồi cách thủy sôi, trên máy khuấy từ hoặc trong lò vi sóng. Làm nguội dung dịch agarose đến 55°C và thêm thuốc nhuộm ethidium bromide (EB) đến nồng độ cuối cùng là 0,5 μg/ml.
(c) Bịt kín các cạnh của tấm thủy tinh hoặc tấm acrylic bằng một lượng nhỏ gel agarose, thêm lược và đặt răng lược cách tấm khoảng 0,5 ~ 1,0 mm.
(d) Đổ liên tục dung dịch gel agarose tan chảy vào khuôn thủy tinh hoặc tấm acrylic (độ dày tùy thuộc vào thể tích mẫu DNA), tránh tạo bọt khí. Hãy để nó đông đặc tự nhiên ở nhiệt độ phòng.
(e) Cẩn thận tháo lược sau khi đã đông đặc hoàn toàn. Thêm một lượng dung dịch đệm điện di thích hợp vào bể gel, đảm bảo rằng tấm gel được ngâm dưới bề mặt của dung dịch đệm điện di khoảng 1 mm.
(2) Chuẩn bị gel Agarose dọc
(a) Loại bỏ dầu mỡ hoặc cặn bám trên tấm kính bằng cách rửa bằng etanol.
(b) Đặt các tấm đệm giữa các đập trước và sau, căn chỉnh các cạnh của các tấm đệm với các đập trước và sau và cố định chúng bằng kẹp.
(c) Thêm 2% agarose vào dung dịch đệm 1x giữa các cạnh của tấm đệm để tạo thành nút agarose cao 1 cm ở đáy buồng đúc gel.
(d) Đổ gel agarose tan chảy ở nồng độ mong muốn, được chuẩn bị trong dung dịch đệm 1x, vào khoang gel cách mặt trên 1 cm.
(e) Đưa lược vào, tránh để bọt khí đọng lại dưới răng lược. Đôi khi, các nếp nhăn có thể xuất hiện ở răng lược trong quá trình làm mát bằng gel agarose; trong những trường hợp như vậy, chỉ cần thêm một ít agarose tan chảy lên trên để làm cứng nó.
(f) Tháo lược ra. Để tránh rò rỉ đệm trong khe nạp, hãy bịt kín mối nối giữa tấm gel agarose và buồng điện di bằng agarose 2% và thêm lượng đệm cần thiết.
(g) Thêm dung dịch đệm điện di 1x vào buồng gel.
(h) Cẩn thận nạp mẫu DNA vào gel agarose bên dưới đệm.
Thông tin thêm về những kiến thức cơ bản về điện di trên gel agarose, chúng tôi sẽ chia sẻ vào tuần tới. Chúc những thông tin này hữu ích cho quá trình thử nghiệm của bạn.
Công ty TNHH Công nghệ sinh học Liuyi Bắc Kinh (Công nghệ sinh học Liuyi) chuyên sản xuất các thiết bị điện di trong hơn 50 năm với đội ngũ kỹ thuật chuyên nghiệp và trung tâm R&D của chúng tôi. Chúng tôi có dây chuyền sản xuất đáng tin cậy và hoàn chỉnh từ thiết kế đến kiểm tra, kho bãi cũng như hỗ trợ tiếp thị. Các sản phẩm chính của chúng tôi là Tế bào điện di (bể/buồng), Bộ nguồn điện di, Bộ chuyển đổi đèn LED xanh, Bộ chuyển đổi tia cực tím, Hệ thống phân tích & hình ảnh gel, v.v.
Chúng tôi hiện đang tìm kiếm đối tác, cả bể điện di OEM và nhà phân phối đều được hoan nghênh.
Nếu bạn có bất kỳ kế hoạch mua hàng nào cho sản phẩm của chúng tôi, vui lòng liên hệ với chúng tôi. Bạn có thể gửi tin nhắn cho chúng tôi qua email[email được bảo vệ]hoặc[email được bảo vệ], hoặc vui lòng gọi cho chúng tôi theo số +86 15810650221 hoặc thêm Whatsapp +86 15810650221 hoặc Wechat: 15810650221.
Vui lòng quét mã QR để thêm vào Whatsapp hoặc WeChat.
Thời gian đăng: Dec-07-2023